,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出目的基因在普通PCR仪上,可以跑出来,跑电泳条带清晰,引物二聚体不明显.但是在realtime-p

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/10 18:42:21
,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出目的基因在普通PCR仪上,可以跑出来,跑电泳条带清晰,引物二聚体不明显.但是在realtime-p

,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出目的基因在普通PCR仪上,可以跑出来,跑电泳条带清晰,引物二聚体不明显.但是在realtime-p
,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出
目的基因在普通PCR仪上,可以跑出来,跑电泳条带清晰,引物二聚体不明显.但是在realtime-pcr上没有扩增的荧光曲线.而且溶解曲线没有明显的峰.模板浓度从10倍稀释,5倍稀释,到2倍稀释都做了,内参基因都可以,不错荧光峰度都较低,目的基因一直没有扩增的荧光曲线....

,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出目的基因在普通PCR仪上,可以跑出来,跑电泳条带清晰,引物二聚体不明显.但是在realtime-p
朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对Realtime PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtime PCR的引物因为要顾及试验体系的要求,所以在引物性能方面有一些牺牲,比如有时候要求180-200bp的扩增需要会牺牲一些性能,比如存在二聚体之类的东西.溶解曲线没有明显的峰说明没有扩增产物,这里面问题很多,比如温度条件、引物条件等等,最好还是能够找公司帮你设计引物,比如takara等公司,可以帮你设计引物.再有一个问题,你说你的模板稀释倍数越来越小依然没有产物,你觉得困扰,其实并不是像你想的那样,按照你的思路,你扩增产物应该是丰度比较低的产物,这样的扩增反应你认为模板量越大越好,其实不然,因为反转录buffer和realtime buffer是不同的,而且反转录体系的一些组分能够抑制realtime反应的进行,因此,可能你稀释倍数越低,最后反而realtime反应的扩增效率越低,你可以尝试把稀释倍数高一些试试看,因为当时我在做实验的时候确实在丁香园上看到有的战友提到过这样的问题,如果再有问题我们可以再讨论,大家一起提高,希望能帮到你.

求助水稻的actin 内参基因引物想用水稻的内参做荧光定量PCR,有哪位大侠有水稻内参Actin的引物么?在下感激不尽! ,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出目的基因在普通PCR仪上,可以跑出来,跑电泳条带清晰,引物二聚体不明显.但是在realtime-p 第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来目的基因的溶解曲线基本没有,模板浓度已经从10倍稀释,到倍稀释,到2倍稀释了.目的基因还是跑不 我要做荧光定量PCR,测细胞因子mRNA,要测三种因子,是否是把三种引物和内参基因引物分别加入到四个体系中 请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右 还想再向您请教下 关于荧光定量PCR 相对定量内参基因的选择,如果我想用18SrRNA,我该怎么得到这个内参呢 关于金银花荧光定量试验中的内参基因选择问题!求助,我要做一个关于金银花定量实验,不知道怎么选择内参基因,同学告诉我说要先筛选几个内参,内参基因可以直接去生物公司合成,不知道内 荧光定量PCR哪个公司做的好?阅微基因在荧光定量PCR做的效果如何? 实时荧光定量pcr内参是什么东西怎么知道自己要买哪个内参 请问做半定量时,可以通过调节PCR后的浓度将内参基因的条带调成一致么? 荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办做荧光定量标准曲线,同时做内参β-actin和自己的基因SA,结果内参相关系数为1.000,扩增效率为99.7%,SA相关系数为0.990,扩增效率为137.3%,初始模板浓度 做荧光定量PCR,但是不知道内参的序列,如果NCBI上没有该怎么设计内参的引物呢? 不同阶段的荧光定量实验都需要做目的基因及内参基因的标准曲线吗 PCR 内参 跑胶我跑半定量PCR的时候,内参出来的亮度不一致,有的 泳道很亮,有的暗一些,那我这张图还可以用吗,因为有人说内参的亮度应该保持一致?不是只要比目的基因和内参的灰度值来比较 rp49基因是什么基因,很多做半定量PCR的用这个基因做内参,想了解下该基因是否是rRNA 有哪位老师在阅微基因做荧光定量PCR呢?现在想做荧光定量PCR,朋友介绍去阅微基因,来交流下, 请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确?那么怎么平衡扩增效率呢? 反转录PCR和荧光定量PCR很纠结的问题.我想做一个基因的表达量定量.之前认为是先提取RNA,然后反转录,然后做荧光定量.现在发现貌似反转录PCR也是可以做定量的,请问是不是这样?这两个怎么都