作业帮有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/08 14:23:52
有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?
有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?
有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?
一、SDS-PAGE电泳所用溶液：
1）30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)
丙烯酰胺 (Arc) 29 g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g
用双蒸水定容至100mL,过滤备用,4℃存放
丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存.
2）5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)
Tris碱 15.1 g
甘氨酸(电泳级) 94 g
10 %SDS 50 mL
使用时稀释5倍使用
3）2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)
0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL
10％(W/V)SDS 4 mL
甘油 2 mL
β-巯基乙醇 1.0 mL
(DTT（二硫苏糖醇） 0.31g)
溴酚兰 0.02g
双蒸水 0.5 mL
室温存放备用
4）考马斯亮蓝染色液
考马斯亮蓝R-250 （G-250） 1.0 g
甲醇 450 mL
冰醋酸 100 mL
ddH2O 450 mL
0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95％乙醇+20mL冰醋酸,定容至200mL,过滤备用
5）考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好,但有毒性）
甲醇 100 mL
冰醋酸 100 mL
ddH2O 800 mL
医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V)
二、SDS-PAGE所需溶液:
A液——30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存.B液——1.5mol/L Tris·HCl,pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱,溶于80mL（40mL）去离子水中,加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8,定容至100mL（50mL）.C液——1.5mol/L Tris·HCl,pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱,溶于80mL（40mL）去离子水中,加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8,定容至100mL（50mL）.D液——10％SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中,定容至100mL(20mL),加热至68℃助溶.E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用.
F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液,室温保存.
三、配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
成分 | 配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/mL | |||||||
| 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 | 40 | 50 |
10 %胶 | ||||||||
水 | 1.9 | 4.0 | 5.9 | 7.9 | 9.9 | 11.9 | 15.9 | 19.8 |
30 %丙烯酰胺混合液 | 1.7 | 3.3 | 5.0 | 6.7 | 8.3 | 10.0 | 13.3 | 16.7 |
1.5 mol/L Tris(pH8.8) | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 | 10.0 | 12.5 |
10 % SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
10 % 过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 | 0.012 | 0.016 | 0.02 |
| ||||||||
12 %胶
| ||||||||
水 | 1.6 | 3.3 | 4.9 | 6.6 | 8.2 | 9.9 | 13.2 | 16.5 |
30 %丙烯酰胺混合液 | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 10.0 | 12.0 | 16.0 | 20.0 |
1.5 mol/L Tris(pH8.8) | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5.0 | 6.3 | 7.5 | 10.0 | 12.5 |
10 % SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
10 % 过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 | 0.012 | 0.016 | 0.02 |
表2. 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液 | ||||||||
成分 | 配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/ml | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 8 | 10 |
水 | 0.68 | 1.4 | 2.1 | 2.7 | 3.4 | 4.1 | 5.5 | 6.8 |
30 %丙烯酰胺混合液 | 0.17 | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 0.83 | 1.0 | 1.3 | 1.7 |
1.5 mol/L Tris(pH6.8) | 0.13 | 0.25 | 0.38 | 0.50 | 0.63 | 0.75 | 1.0 | 1.25 |
10 % SDS | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
10 % 过硫酸铵 | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
TEMED | 0.001 | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.005 | 0.006 | 0.008 | 0.01 |