作业帮分子生物学实验中PCR各组分的作用
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/04 22:22:53
分子生物学实验中PCR各组分的作用
分子生物学实验中PCR各组分的作用
分子生物学实验中PCR各组分的作用
PCR,即链式酶聚合反应,反应管中各组分如下：
扩增缓冲液：
缓冲液有助于酶的稳定,是给聚合酶提供一个最适合酶催化反应条件；
4种dNTP混合物：
四种脱氧核苷酸,是DNA的原料；
引物：
DNA合成不能从零开始,必须要有引物,从引物末端开始延伸,合成整条链；
模板：
DNA合成需要模板链；
Taq DNA聚合酶：
催化PCR反应,该酶是从Thermus aquaticus细菌中提取的特殊的耐热DNA聚合酶,可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本；
Mg2+：
Mg与dNTP以及DNA模板结合形成复合体,只有这种复合体才能被DNA聚合酶识别；
加双或三蒸水：
调节反应体系的浓度用；
类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时
间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与...
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类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时
间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
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