在制备感受态细胞的实验中药注意哪些细节

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/28 03:06:25

在制备感受态细胞的实验中药注意哪些细节
在制备感受态细胞的实验中药注意哪些细节

在制备感受态细胞的实验中药注意哪些细节
A）细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌,最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液.细胞生长密度以刚进入对数生长期时为宜,可通过监测培养液的OD600 来控制.DH5α菌株的OD600为0.5时,细胞密度在5×107 个/mL左右,这时比较合适.密度过高或不足均会影响转化效率.
B）所有操作均应在无菌条件和冰上进行；实验操作时要格外小心,悬浮细胞时要轻柔,以免造成菌体破裂,影响转化.
C）经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；
D）化合物及无机离子的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或 Co2+）、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高（100-1000倍）；
E）所使用的器皿必须干净.少量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；

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